在细胞实验研究中，CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖和毒性检测试剂。然而，许多研究人员在使用CCK-8时，可能会遇到显微镜下细胞生长趋势与测得的OD值不一致的情况。这种现象不仅令人困惑，还可能影响实验结果的准确性。   显微镜下细胞生长趋势与OD值不一致的可能原因 ① 实验操作实验操作中的误差是导致显微镜下细胞生长趋势与OD值不一致的常见原因之一。例如，CCK-8试剂的添加量、孵育时间、混匀程度等操作步骤的不规范，都可能影响OD值的准确性。此外，细胞接种密度不均匀也会导致不同孔之间的OD值差异较大。 ② 培养基和培养条件因素培养基的成分和培养条件对细胞的生长和代谢有重要影响。如果培养基中的营养物质不足或存在抑制细胞生长的成分，可能会导致细胞生长受限，从而影响OD值的测定。此外，培养箱的温度、湿度和CO2浓度不稳定，也可能导致细胞生长状态不一致，进而影响OD值的准确性。 ③ 细胞状态和药物影响细胞的状态和药物的处理也是影响OD值的重要因素。例如，细胞在传代过程中可能出现老化或损伤...

流式细胞仪作为细胞分析的核心工具，其运行稳定性直接影响实验成败。当仪器无法正常吸取细胞时，不仅会延误实验进度，还可能因反复排查消耗大量样本。本文将系统解析吸样失败的常见原因及解决方案。一、样本问题 1. 细胞悬液浓度异常 a. 问题：细胞浓度过低吸样时负压不足，导致仪器反复“空吸”或触发报警。或过高细胞黏连成片，引发管路黏滞性堵塞。 ¡ 隐藏风险：某些凋亡细胞或碎片即使浓度达标，仍可能因黏附性增强引发堵塞。 b. 解决：调整浓度，必要时用PBS稀释或离心浓缩。   2. 细胞团块或杂质堵塞 a. 问题： ¡ 机械损伤：移液操作过于剧烈导致细胞破裂，释放DNA形成网状团块。 ¡ 死亡细胞聚集：长时间静置样本中死细胞相互黏附。 b. 解决：使用细胞滤网过滤样本，常规用40 μm尼龙滤网；处理原代细胞或脆弱细胞时，可选用70 μm滤网减少剪切力。细胞离心后轻柔重悬，避免剧烈震荡。  细胞滤网3. 样本管适配性差 a. 问题：非专用管（如EP管）规格不匹配，导致吸样针无法有效接触管底残留样本。 b. 解决：更...

#蛋白数据库 #生信数据库 有没有遇到这样的情况，看到一个感兴趣的蛋白，想知道它在哪些细胞和组织中表达。 除了在文献库检索一篇篇地看文献，还可以利用数据库检索！！ 给大家介绍一个很好用的蛋白数据库：THE HUMAN PROTEIN ATLAS。不需要注册就可以直接使用。 打开网页我们可以马上看到搜索栏，直接输入感兴趣的蛋白名称，我们以PD-L1为例，进行检索。注意有的蛋白名字很多，它不一定会显示你最初输入的那一个名字，如这里，显示的就是PD-L1的另一个名字CD274。可以看到有的格子上面有绿色的半圆或者完整的圆形，圆形越完整，代表这个数据可信度越高。最可信是完整的圆形（enhanced），其次是3/4（supported）,1/2(approved),1/4(uncertain)。 我们直接点击CD274进入详情页面，就可以看到很多详细的信息。首先网页默认进入summary的界面，我们可以看到CD274的基本情况，可以找到我们一开始输入的PD-L1是它的一个别名。 下面几个灰色的框可以查看基本情况。例如：Tissue profile可以看到PD-L1在组织的概况，主要在免疫细胞亚...

在生物化学与分子生物学研究中，Western Blotting（WB）技术作为研究蛋白质表达的关键手段，其步骤的精确性和试剂的选择对实验结果至关重要。传统的WB实验中，甲醇在转膜步骤中扮演着重要角色，尤其是用于PVDF膜的激活。然而，甲醇的使用也伴随着一系列局限性和健康风险。 WB实验流程图   ①PVDF膜为什么要用甲醇激活？ PVDF（偏聚氟乙烯）膜因其优良的机械强度和蛋白质结合能力，在WB实验中广泛应用。然而，原始的PVDF膜是高度疏水的，不利于蛋白质在其表面的吸附和转移。甲醇激活PVDF膜的过程主要通过以下几个机制发挥作用： ‌去除生产残留物与污染物‌：甲醇能有效去除PVDF膜表面的生产残留物和储存相关的污染物，这些残留物可能会干扰蛋白质的有效转移和检测。‌增加膜的亲水性‌：甲醇处理可以改变PVDF膜的表面特性，使其从疏水变为亲水。亲水性的增加有助于膜更好地吸附水基介质中的蛋白质，提高转膜效率。‌去除SDS并改善蛋白质结合‌：SDS-PAGE电泳过程中，蛋白质表面包裹SD...

当我们处理完qpcr数据，该怎么作图呈现结果呢？假设我们有一组模拟数据，是计算好的表达差异数值……