流式细胞仪作为细胞分析的核心工具，其运行稳定性直接影响实验成败。当仪器无法正常吸取细胞时，不仅会延误实验进度，还可能因反复排查消耗大量样本。本文将系统解析吸样失败的常见原因及解决方案。一、样本问题 1. 细胞悬液浓度异常 a. 问题：细胞浓度过低吸样时负压不足，导致仪器反复“空吸”或触发报警。或过高细胞黏连成片，引发管路黏滞性堵塞。 ¡ 隐藏风险：某些凋亡细胞或碎片即使浓度达标，仍可能因黏附性增强引发堵塞。 b. 解决：调整浓度，必要时用PBS稀释或离心浓缩。   2. 细胞团块或杂质堵塞 a. 问题： ¡ 机械损伤：移液操作过于剧烈导致细胞破裂，释放DNA形成网状团块。 ¡ 死亡细胞聚集：长时间静置样本中死细胞相互黏附。 b. 解决：使用细胞滤网过滤样本，常规用40 μm尼龙滤网；处理原代细胞或脆弱细胞时，可选用70 μm滤网减少剪切力。细胞离心后轻柔重悬，避免剧烈震荡。  细胞滤网3. 样本管适配性差 a. 问题：非专用管（如EP管）规格不匹配，导致吸样针无法有效接触管底残留样本。 b. 解决：更...

#蛋白数据库 #生信数据库 有没有遇到这样的情况，看到一个感兴趣的蛋白，想知道它在哪些细胞和组织中表达。 除了在文献库检索一篇篇地看文献，还可以利用数据库检索！！ 给大家介绍一个很好用的蛋白数据库：THE HUMAN PROTEIN ATLAS。不需要注册就可以直接使用。 打开网页我们可以马上看到搜索栏，直接输入感兴趣的蛋白名称，我们以PD-L1为例，进行检索。注意有的蛋白名字很多，它不一定会显示你最初输入的那一个名字，如这里，显示的就是PD-L1的另一个名字CD274。可以看到有的格子上面有绿色的半圆或者完整的圆形，圆形越完整，代表这个数据可信度越高。最可信是完整的圆形（enhanced），其次是3/4（supported）,1/2(approved),1/4(uncertain)。 我们直接点击CD274进入详情页面，就可以看到很多详细的信息。首先网页默认进入summary的界面，我们可以看到CD274的基本情况，可以找到我们一开始输入的PD-L1是它的一个别名。 下面几个灰色的框可以查看基本情况。例如：Tissue profile可以看到PD-L1在组织的概况，主要在免疫细胞亚...

在生物化学与分子生物学研究中，Western Blotting（WB）技术作为研究蛋白质表达的关键手段，其步骤的精确性和试剂的选择对实验结果至关重要。传统的WB实验中，甲醇在转膜步骤中扮演着重要角色，尤其是用于PVDF膜的激活。然而，甲醇的使用也伴随着一系列局限性和健康风险。 WB实验流程图   ①PVDF膜为什么要用甲醇激活？ PVDF（偏聚氟乙烯）膜因其优良的机械强度和蛋白质结合能力，在WB实验中广泛应用。然而，原始的PVDF膜是高度疏水的，不利于蛋白质在其表面的吸附和转移。甲醇激活PVDF膜的过程主要通过以下几个机制发挥作用： ‌去除生产残留物与污染物‌：甲醇能有效去除PVDF膜表面的生产残留物和储存相关的污染物，这些残留物可能会干扰蛋白质的有效转移和检测。‌增加膜的亲水性‌：甲醇处理可以改变PVDF膜的表面特性，使其从疏水变为亲水。亲水性的增加有助于膜更好地吸附水基介质中的蛋白质，提高转膜效率。‌去除SDS并改善蛋白质结合‌：SDS-PAGE电泳过程中，蛋白质表面包裹SD...

当我们处理完qpcr数据，该怎么作图呈现结果呢？假设我们有一组模拟数据，是计算好的表达差异数值……