运输储存条件： RNAZol Buffer2-8℃运输保存，其它试剂和离心柱常温运输，室温（15-25℃) 保存。Elution buffer 建议首次用前分装成小份室温（15-25℃) 保存。保质期为一年。

产品简介：

本试剂盒适用于从细胞、动物组织样品中快速提取高质量的总RNA。本试剂盒裂解液含异硫氰酸胍和酚，能迅速裂 解生物样品并失活RNA酶，确保RNA提取的完整性。本试剂盒操作简单快速，性能稳定可靠，不使用氯仿，也无需 进行耗时的醇沉淀，整个提取过程约25分钟，所提RNA产量大纯度高，适用于RT-PCR 、RT-qPCR、Northern、基因 表达芯片分析、高通量测序等实验。

产品组成：

准备事项

1.     本试剂盒裂解液含酚，RNA 洗脱之前的步骤全程在通风橱操作，并穿戴好防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不慎接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗；接触到皮肤，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请前往医院治疗。
2.     第一次使用前，必须向Wash Buffer中加入 90 ml 无水乙醇，并充分摇匀。
3.     首次使用建议先将Elution buffer 在超净工作台小份分装。

操作步骤

1. 样本匀浆步骤

动物组织: 取 10-50 mg 动物组织到离心管中，加入 0.5 ml RNAZol Buffer，立即用研磨杵或匀浆器进行充分匀浆。

肝脏、脾脏、肾脏等组织样品富含 RNA 和蛋白质，建议把样品量控制在 10-25mg。

组织用量参考

贴壁细胞：去除培养液，用 1×PBS 清洗一次。对于六孔板（直径 3.5cm），每孔加入 0.5ml RNAZol Buffer, 用移液枪反复吸打约 10 次让细胞裂解并脱落下来。（对于 10cm2 面积的培养瓶，加入 2 ml RNAZol Buffer 。）

悬浮细胞: 离心收集细胞(<5×10^6 细胞)，用 1×PBS 清洗一次后离心，吸弃残液。涡旋或弹打松散细胞。加入 0.5 ml RNAZol Buffer，用移液枪反复吸打约 10 次让细胞充分裂解。

2. 按0.5 ml RNAZol Buffer 加入200 µl Elution Buffer , 上下颠倒混匀，室温放置 5 分钟。
3. 室温，12000×g 离心10 分钟。

RNA 结合步骤

4. 转移500 µl 上清液至新的1.5 ml 离心管中，加入等倍体积异丙醇，上下颠倒混匀，液体转入 RNA 纯化柱（含收 集管）。（注：上层水相约 600 μl ，建议吸取 500 μl，以免吸到杂质造成污染；提取微量样本时，为减少损失可转 移全部上清。）
5. 室温，12000×g 离心1 分钟，弃滤液。

柱清洗步骤

6. 加入500 μl Wash Buffer 至RNA 纯化柱（含收集管），室温 12000×g 离心 1 分钟，弃滤液。
7. 重复步骤6 一次。
8. 将RNA 纯化柱装回收集管，空管室温12000×g 离心 1 分钟。

RNA 洗脱步骤

9.于超净台中将 RNA 纯化柱转入干净的无 RNA 酶的 1.5 ml 离心管，弃收集管，纯化柱开盖晾干 2 分钟。

10.在 RNA 纯化柱膜中央部位加入 20-30 μl 的 Elution Buffer，室温静置 2 分钟。

11. 室温12000×g 离心 1 分钟，弃纯化柱，1.5 ml 离心管中产物即为 RNA ，置于-80℃保存。 

注意事项

提取过程在室温进行，按推荐使用合适的样本量，以避免产生不溶物堵塞离心柱。试剂盒开封后，每次使用应严格按照规范操作，谨防RNA 酶污染，Elution Buffer 需分装成小份保存。

 Wash Buffer 首次使用前需加入对应体积无水乙醇并充分摇匀。

为充分溶解RNA，洗脱液的体积最好不低于 20 μl。重复洗脱可提高 RNA 产量。洗脱液需加至 RNA 纯化柱中央 的膜上，不可加至侧壁。

为保证提取质量，建议全程使用无RNA 酶的试剂耗材，尤其是 RNA 洗脱步骤。