产品简介

本产品采用经典的碱裂解法，通过柱式法的硅胶膜技术，可用于从 1~5 mL 过夜培养的菌液中提取高质量的质粒，有效 去除蛋白、多糖等杂质。操作简便快捷， 35 min 内可完成质粒提取。

提取的质粒 DNA 产量及纯度高，可直接用于酶切、连接、转化、 PCR、测序等实验。

产品组成

储存条件

本产品的溶液 L 置于 2~8℃储存， 其他组分室温储存。若 RNase A 已全部加入溶液 P1 中且混匀，需将溶液 P1 储存于 2~8℃,  有效期 6 个月。

实验前准备

1、首次使用前，将 RNase A 全部加入至溶液 P1 中，混匀后做上标记。

2、准备 1.5/2 mL 离心管、 80%乙醇、异丙醇等。

使用方法

1、按需取 1~5 mL 过夜培养的菌液于2 mL 离心管中， 14000 ×g 离心 1 min 收集菌体（菌液较多时可通过多次离心将 菌体沉淀收集于同一离心管），吸弃液体，液体要弃尽。

2、依次加入 250 μL 溶液 P1（已含 RNase A）和 5 μL 溶液 L，涡旋菌体直至完全重悬。

注意：如果菌体未能全部重悬散开， 会影响下一步的碱裂解，进而影响质粒的提取产量。 溶液 L 可以提升质粒的提取产 量，请先在离心管里加入溶液 P1 ，再将 5  μL 溶液 L 打到溶液 P1 内，以免损耗。

3、加入 250 μL 溶液 P2 ，温和地上下颠倒 8 次，室温静置 3 min（不应超过 5 min）。

注意：此步切勿剧烈震荡，应温和地混合，避免残留基因组 DNA。裂解时间不应超过 5 min，避免质粒受到破坏， 此时 的菌液应变为清亮黏稠，若菌液仍未清亮， 可能是菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

4、加入 250 μL 溶液 P3 ，立即上下颠倒 15 次 ，此时应出现白色絮状沉淀， 14000 ×g 离心 10 min。

注意：溶液 P3 加入后应立即混匀， 避免产生局部沉淀。

5、将上清液转移至新的2 mL 离心管中 ，加入 0.5 倍上清液体积的异丙醇 ，上下颠倒 15 次以至混匀。

6、将步骤 5 的混合液转移至吸附柱（已放入收集管） 中 ， 14000 ×g 离心 30 sec，弃滤液。

注意：吸附柱的最大承载容积是 750 μL ，若混合液超过该体积，需分多次上柱。

7、重复步骤 6 ，直至混合液全部上柱。

8、加入 500 μL 除蛋白液至吸附柱中，室温静置 30 sec ， 14000 ×g 离心 30 sec，弃滤液。

9、加入 700 μL 80%乙醇至吸附柱中，室温静置 30 sec ， 14000 ×g 离心 30 sec，弃滤液。

10、将吸附柱放回收集管中， 14000 ×g 离心 1 min。

11、将吸附柱放入新的 1.5 mL 离心管中， 加入 30 μL~100 μL ddH2O 至吸附柱的膜中央，室温静置 1 min ， 14000 × g 离心 1 min，弃吸附柱。

12、提取的质粒 DNA 于-20℃保存。

注意事项

1、溶液 P2 在低温时会有沉淀析出，若有沉淀析出， 将其置于 37℃中复溶至溶液澄清后方可使用。

2、各组分使用后应及时盖紧盖子， 避免长时间暴露于空气中导致醇挥发、 pH 值变化等。