本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE

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什么是质粒？质粒是细菌或酵母等生物体内独立于染色体之外的小型环状DNA分子。它们通常携带一些非必需但对宿主有利的基因，比如抗生素抗性基因。 为什么要给质粒做电泳 质粒做电泳的核心目的在于验证提取的质粒是否完整、纯度如何，值不值得继续往下做实验，是所有下游操作前最廉价也最关键的质控步骤。 质粒电泳几条条带是正常的质粒电泳后看到几条条带，取决于质粒本身的构型、提取质量和电泳条件。 简单来说，最常见的答案是：在标准的琼脂糖凝胶电泳中，未经酶切的质粒通常会看到1到3条条带。 下面详细解释一下这些条带分别代表什么，以及为什么会看到不同数量的条带。 质粒的三种主要构型 超螺旋构型 结构最紧密，在凝胶电泳中跑得最快，位置最靠下。这是最理想、最完整的质粒形态。 开环构型 结构松散，在凝胶中受到的阻力最大，跑得最慢，位置最靠上。 线性构型 泳动速度介于超螺旋和开环之间，如果存在，会在超螺旋和开环之间。 除了最典型的三条带情况，根据质粒质量和实验处理，您可能还会观察到以下几种情况： 只有一条条带 通常是超螺旋条带：如果质粒...

大多数Oligo最终都是干粉形式，如果合成量足够多，能够在管子底部看到透明或类白色的薄片。通常建议配成浓度为100 μM母液保存，再稀释配制工作液使用。为什么不直接用母液去跑qPCR啊？ 刚好最近客户就有这样的情况，一开始他就是直接用100 μM的引物去跑的，结果给大家看看。 100uM的引物跑的（20ul体系上0.4ul的引物F和引物R） 一开始看到这样的图，我们也没搞清楚，怎么回事。去到实验室了解之后，才发现是直接用母液跑的qPCR。经过调整，结果如下。 10uM的引物跑的（20ul体系上0.4ul的引物F和引物R） 为什么不建议用100 μM的引物跑qPCR引物二聚体形成当引物浓度过高时，引物分子之间（尤其是正向和反向引物之间）相遇并互补结合的概率大大增加，即使它们与模板DNA并不完全匹配。酶会以这种“引物二聚体”为模板进行延伸，生成短小的、非特异性的PCR产物。 后果： 竞争资源：引物二聚体会与目标基因竞争反应体系中的DNA聚合酶、dNTPs等宝贵资源，导致目标产物的扩增效率下降。 荧光背景升高：在SYBR Green法中，染料会嵌入任何...

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